小而密低密度脂蛋白膽固醇及其與低密度脂蛋白膽固醇之比與頸動脈粥樣硬化斑塊的關系

                  發布于:2018-09-29

                  文章來源:[中文]九強生物

                  低密度脂蛋白膽固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)具有異質性,由一系列大小、密度和化學組成各異的顆粒組成。一般將LDL-C亞組份中顆粒較小密度較大的LDL-C稱小而密LDL-C (small dense low-density lipoprotein cholesterol,sdLDL-C)。

                  流行病學顯示LDL-C與動脈粥硬化密切相關,而近年來發現LDL-C的亞組分之一即sdLDL-C與動脈粥樣硬化斑塊的關系更為密切,但是對于動脈粥樣硬化斑塊患者中sdLDL-C與LDL-C之比以及LDL-C水平正常者的sdLDL-C和sdLDL-C/LDL-C水平尚缺乏研究。

                  本研究創新性的在頸動脈斑塊患者中引入sdLDL-C/LDL-C指標,并分析LDL-C水平正常者的sdLDL-C和sdLDL-C/LDL-C比值水平,旨在探索sdLDL-C水平和sdLDL-C/LDL-C比值與頸動脈粥樣硬化性斑塊的關系,從而探討兩者作為頸動脈斑塊診斷的臨床指標可能性提供依據。

                  對象與方法

                  ?一、對象

                  連續收集2015年11月至2016年2月在首都醫科大學附屬北京安貞醫院體檢中心行頸動脈超聲者174名,男93名,女81名,年齡為30~86歲,平均年齡(53.11±11.06)歲,男女比例為1.15∶1.00。其中對照組82名,頸動脈超聲顯示雙側頸動脈正常,經生物化學指標、胸片、心電圖、超聲心動圖、B超及臨床各項檢查排除心腦血管疾病患者。頸動脈內膜厚度異常組92例,經頸動脈超聲證實雙側頸動脈中至少有一支存在頸動脈內膜增厚或動脈粥樣硬化性斑塊。所有受試者均無腦卒中既往史,并排除各種原因導致的肺源性心臟病、肺動脈高壓、血液病、嚴重肝腎功能不全、嚴重感染、腫瘤等疾病且未服用過任何降脂藥物。本研究獲首都醫科大學附屬北京安貞醫院倫理委員會批準(2017039X),檢查前所有對象均簽署知情同意書。

                  二、方法

                  1.標本采集與保存:

                  受試者空腹12 h以上,于次日清晨采集肘靜脈血5 ml分離血清,測定甘油三酯(triglyceride,TG)、LDL-C和高密度脂蛋白膽固醇(High-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)。同時吸取500 μl血清于EP管中,凍存至-80 ℃保存統一進行sdLDL-C檢測。

                  ?

                  2.試劑與儀器:

                  所有檢測指標均由Beckman(美國貝克曼庫爾特)AU5400全自動生化分析儀測定。TG、LDL-C和HDL-C試劑購自日本積水醫療株式會社,sdLDL-C試劑購自北京九強生物有限公司。TG檢測采用IFCC推薦的酶法,檢測范圍為(0.339~226)mmol/L。LDL-C采用第三代均相法,檢測范圍為(0.03~10.30)mmol/L。HDL-C采用第三代均相法,檢測范圍為(0.03~4.70)mmol/L。sdLDL-C檢測采用過氧化物酶法,檢測范圍為(0.04~2.59)mmol/L,當LDL-C濃度超過7.77 mmol/L時,將樣品用9 g/L氯化鈉溶液作1+3稀釋重新測定,結果乘以4。

                  ?

                  3.頸動脈超聲檢查:

                  使用東芝Aplion-500超聲診斷儀(探頭頻率4~11 MHz),根據《血管超聲檢查指南》對頸動脈斑塊評價方法,將頸動脈內膜厚度異常組進一步分類,發現局限性回聲結構突出管腔(回聲結構可不均勻或伴聲影)頸動脈內膜中層厚度(intima-media wall thickness, IMT)≥1.0 mm者分為IMT增厚組,IMT≥1.5 mm者分為斑塊組。將頸動脈斑塊組進一步分亞組,任意一側頸動脈有一處斑塊形成納入單發斑塊組,大于兩處斑塊形成納入多發斑塊組。

                  三、統計學分析

                  采用SPSS 17.0統計軟件進行。分布及近似正態的數據以`x±s表示,兩組間均數比較使用獨立樣本t檢驗,多組間均數比較使用單因素方差分析TG檢測數據為正偏態分布,數據以中位數(四分位數)[M(P25,P75)]表示,兩組間比較使用Mann-Whitney?U檢驗,多組間均數比較使用Kruskal-Walli?H檢驗。率的比較使用χ2檢驗。指標和指標之間的相關性分析正態分布數據使用Person相關分析,非正態分布數據使用Sperman相關分析。使用二元Logistic逐步回歸方程評估IMT異常的獨立危險因素,有序多分類Logistic回歸模型評價頸動脈IMT增厚和頸動脈斑塊的獨立危險因素。指標的診斷效能采用ROC曲線。以P<0.05為差異具有統計學意義。

                  結果

                  ?一、研究對象各組間臨床資料及血脂水平比較

                  IMT異常組與對照組的性別比例、BMI、吸煙史、飲酒史、運動史、高血壓患病率、冠心病患病率、TG和HDL-C均無統計學差異(P>0.05)。IMT異常組的年齡、糖尿病患病率、LDL-C、sdLDL-C和sdLDL-C/LDL-C比值高于對照組,差異有統計學意義(P<0.05),見表1。

                  表1?IMT異常組與對照組基本信息比較[`x±s, n(%), M(P25,P75)]

                  頸動脈斑塊組、IMT增厚組與對照組的性別比例、BMI、吸煙史、飲酒史、運動史、高血壓患病率、冠心病患病率、TG、HDL-C和LDL-C在三組間均無統計學差異(P>0.05)。年齡、sdLDL-C和sdLDL-C/LDL-C比值在頸動脈斑塊組和IMT增厚組高于對照組,差異有統計學意義(P<0.01),在頸動脈斑塊組和IMT增厚組之間差別無統計學意義(P>0.05)。糖尿病患病率在IMT增厚組高于頸動脈斑塊組和對照組(P<0.01),在頸動脈斑塊組和對照組之間差別無統計學意義(P>0.05),見表2。

                  表2?頸動脈斑塊組、IMT增厚組與對照組基本信息比較[`x±s, n(%), M(P25,P75)]

                  將頸動脈斑塊組進一步分為單發斑塊組和多發斑塊組,各組臨床資料及血脂水平見表3。性別比例、BMI、吸煙史、飲酒史、運動史、高血壓患病率、冠心病患病率、TG、HDL-C和LDL-C在各組間比較差異無統計學意義(P>0.05)。糖尿病患病率在單發斑塊組和多發斑塊組低于IMT增厚組(P<0.01)。年齡、sdLDL-C和sdLDL-C/LDL-C比值在多發斑塊組、單發斑塊組和IMT增厚組高于對照組,差異有統計學意義(P<0.01)。其中年齡在多發斑塊組、單發斑塊組和IMT增厚組之間差別無統計學意義。sdLDL-C和sdLDL-C/LDL-C比值在多發斑塊組高于單發斑塊組和IMT增厚組,在單發斑塊組和IMT增厚組之間差別無統計學意義。



                  表3?不同頸動脈斑塊亞組間基本信息比較[`x±s,n(%),M(P25,P75)]

                  二、指標間相關性分析

                  sdLDL-C與其他指標間的相關系數見表4。在所有受試者中,sdLDL-C與年齡(P<0.001)和sdLDL-C/LDL-C呈正相關(r=0.851,P<0.001)。在控制年齡因素影響后,sdLDL-C與LDL-C(r=0.226,P<0.01)和sdLDL-C/LDL-C呈正相關(r=0.830,P<0.001)。另外LDL-C和sdLDL-C/LDL-C呈負相關(r=-0.288,P<0.001)。HDL和BMI呈負相關(r=-0.292,?P<0.001)和TG呈負相關(r=-0.489,P<0.001)。

                  表4?sdLDL-C與其他指標間的相關系數

                  在IMT異常組中,HDL和TG呈負相關(r=-0.330,P=0.001)。在IMT增厚組中,HDL和LDL-C呈負相關(r=-0.379,P<0.05),與TG呈負相關(r=-0.502,P<0.01)。在頸動脈斑塊組中,sdLDL-C與TG呈負相關(P<0.05)。LDL-C與sdLDL-C/LDL-C呈負相關(r=-0.438,P<0.001)。在對照組中,HDL和BMI呈負相關(r=-0.391,?P<0.001),和TG呈負相關(r=-0.638,P<0.001)。

                  三、頸動脈IMT增厚和頸動脈斑塊影響因素的多變量Logistic回歸分析

                  將表2中頸動脈IMT增厚組、頸動脈斑塊組和對照組之間有統計學差異的年齡、糖尿病、sdLDL-C、sdLDL-C/LDL-C為自變量代入有序多分類Logistic回歸模型,頸動脈IMT增厚和頸動脈斑塊為因變量,應用有序分類的Logistic模型進行分析,結果顯示年齡和sdLDL-C是IMT增厚和頸動脈斑塊的獨立危險因素(表5)。

                  表5?頸動脈IMT增厚和頸動脈斑塊危險因素Logistic回歸結果


                  ? ? ? 將表1中IMT異常組與對照組之間有統計學差異的年齡、糖尿病、LDL-C、sdLDL-C、sdLDL-C/LDL-C為自變量代入二元Logistic回歸模型,頸動脈IMT異常為因變量,應用Forward:Conditional法,經過變量篩選后顯示年齡、糖尿病和sdLDL-C被引入模型,是IMT異常的獨立危險因素。去除干擾指標后單獨將年齡、糖尿病和sdLDL-C代入二元Logistic回歸模型,應用Enter法進行統計分析,結果見表5。

                  四、LDL-C水平正常(<2.59 mmol/L)的不同頸動脈斑塊組間血脂水平比較

                  LDL-C水平正常的IMT異常組與對照組的性別比例、BMI、吸煙史、飲酒史、運動史、高血壓患病率、冠心病患病率、TG、HDL-C和LDL-C均無統計學差異(P>0.05)。LDL-C水平正常的IMT異常組的年齡、糖尿病患病率、sdLDL-C和sdLDL-C/LDL-C比值高于對照組,差異有統計學意義(P<0.05),見表6。

                  表6?LDL-C水平正常(<2.59mmol/L)的IMT異常組與對照組基本信息比較[`x±s, n(%), M(P25,P75)]

                  LDL-C水平正常(<2.59mmol/L)的受試者頸動脈斑塊組、IMT增厚組與對照組的臨床資料及血脂水平見表7。性別比例、BMI、吸煙史、飲酒史、運動史、高血壓患病率、冠心病患病率、TG、HDL-C和LDL-C在3組間差異均無統計學意義(P>0.05)。年齡在頸動脈斑塊組高于IMT增厚組和對照組,差異有統計學意義(P<0.01)。sdLDL-C、sdLDL-C/LDL-C比值和糖尿病患病率在頸動脈斑塊組和IMT增厚組高于對照組,差異有統計學意義(P<0.01),在頸動脈斑塊組和IMT增厚組之間差異無統計學意義(P>0.05)。



                  表7?LDL-C水平正常(<2.59mmol/L)的頸動脈斑塊組、IMT增厚組與對照組基本信息比較[`x±s, n(%), M(P25,P75)]

                  性別比例、BMI、吸煙史、飲酒史、運動史、高血壓患病率、冠心病患病率、糖尿病患病率、TG、HDL-C和LDL-C在LDL-C水平正常(<2.59 mmol/L)的受試者頸動脈多發斑塊組、單發斑塊組、IMT增厚組與對照組四組間差異均無統計學意義(P>0.05)。年齡在對照組水平低于其他各組,差異有統計學意義(P<0.01)。sdLDL-C水平在多發斑塊組高于對照組,差異有統計學意義(P<0.01)。sdLDL-C/LDL-C比值在多發斑塊組高于其他各組,差異有統計學意義(P<0.01),見表8。

                  表8?LDL-C水平正常(<2.59mmol/L)的不同頸動脈斑塊亞組間血脂水平比較[`x±s,n(%),M(P25,P75)]

                  五、sdLDL-C和sdLDL-C/LDL-C比值對頸動脈斑塊患者診斷價值

                  使用ROC曲線法評估LDL-C診斷IMT異常患者(包括IMT增厚、單發斑塊和多發斑塊患者)的曲線下面積(AUC)為0.578(95%?CI:0.492~0.664,?P=0.081)。sdLDL-C和sdLDL-C/LDL-C在區分IMT異常患者的曲線下面積(AUC) 均達到70%以上。sdLDL-C和sdLDL-C/LDL-C診斷IMT斑塊患者的AUC均達到80%以上。sdLDL-C和sdLDL-C/LDL-C診斷IMT異常、斑塊和多發斑塊患者的cut-off值、敏感度、特異度、約登指數、AUC和P值見表9。




                  表9?sdLDL-C和sdLDL-C/LDL-C對頸動脈內膜異常、斑塊及多發斑塊患者的ROC數據比較

                  sdLDL-C和sdLDL-C/LDL-C在區分LDL-C水平正常 (<2.59 mmol/L)的IMT異常患者(包括IMT增厚、單發斑塊和多發斑塊患者)的曲線下面積(AUC) 均達到80%以上,區分LDL-C水平正常(<2.59mmol/L)的頸動脈斑塊患者AUC>70%。sdLDL-C和sdLDL-C/LDL-C診斷LDL-C水平正常 (<2.59 mmol/L)的頸動脈多發斑塊患者的AUC均達到90%以上。診斷cut-off值、敏感度、特異度、約登指數、AUC和P值見表9。

                  討 論

                  本研究將小而密低密度脂蛋白膽固醇(sdLDL-C)所研究對象,分析頸動脈斑塊患者、內膜異常患者和正常對照組之間血脂水平變化。研究結果顯示頸動脈IMT異常患者的LDL-C水平明顯高于對照組,但是在IMT增厚與斑塊組之間及頸動脈斑塊各亞組之間沒有差異。sdLDL-C和sdLDL-C/LDL-C的水平在頸動脈IMT異常組明顯高于對照組,并且多發斑塊組的水平明顯高于其他各組,提示sdLDL-C和sdLDL-C/LDL-C具有早期識別IMT異常的能力,且隨著斑塊嚴重程度發展可進一步識別出多發斑塊,因此sdLDL-C和sdLDL-C/LDL-C可能可以彌補LDL-C在疾病程度分層中的局限性。并且在所有受試者中sdLDL-C與LDL-C呈現一定的相關性,但是在頸動脈斑塊不同嚴重程度分組中sdLDL-C與LDL-C無相關性,從另一個側面反映sdLDL-C與LDL-C在不同的疾病分層中具有不同的水平。

                  ?

                  二元Logistic回歸分析經過變量篩選后年齡、糖尿病發病率和sdLDL-C被引入IMT增厚危險因素模型,而sdLDL-C/LDL-C由于與sdLDL-C的相關性較好(r=0.830,?P=0.000),會相互影響而干擾Logistic回歸模型被剔除出模型。雖然糖尿病比例在IMT增厚組和斑塊組高于對照組,在IMT增厚和斑塊危險因素的有序多分類Logistic回歸模型顯示,糖尿病比例不是IMT增厚和斑塊發生的獨立危險因素。年齡在IMT異常組與正常組之間存在差異,但在多發斑塊、單發斑塊和IMT增厚組之間年齡并無差異,說明sdLDL-C和sdLDL-C/LDL-C在多發斑塊組中的升高并非因年齡因素造成。LDL-C未能進入模型,提示sdLDL-C是頸動脈斑塊發生的獨立危險因素,其對頸動脈斑塊的提示作用有可能優于LDL-C。

                  ?

                  結果顯示LDL-C水平正常的頸動脈IMT異常組sdLDL-C和sdLDL-C/LDL-C比值依然是高于對照組的。并且sdLDL-C和sdLDL-C/LDL-C比值在多發斑塊組高于其他各組。糖尿病比例和年齡在各組間無差別,提示sdLDL-C和sdLDL-C/LDL-C在發斑塊組中的高水平不受年齡和糖尿病發生率影響。Arai等的研究結果顯示,在調整了LDL-C的因素后,sdLDL-C依然和CVD、腦卒中、腦梗死以及冠心病的發生顯著相關,與本研究的結果相一致。同時最近的隨訪研究結果亦顯示在LDL-C正常的人群中sdLDL-C依然是冠心病發生的危險因素。

                  ?

                  ROC曲線分析結果顯示,在sdLDL-C和sdLDL-C/LDL-C比值分別為0.90 mmol/L、0.30時,診斷頸動脈多發斑塊的敏感度分別為88%、79.3%,特異度分別為84.0%、74.5%,說明sdLDL-C和sdLDL-C/LDL-C比值對多發斑塊有較好的診斷效能。當sdLDL-C和sdLDL-C/LDL-C比值分別為0.90mmol/L、0.70時,診斷LDL-C水平正常的頸動脈多發斑塊的敏感度分別為100%、83.3%,特異度分別為86.7%、100%,提示在LDL-C水平正常的人群中sdLDL-C和sdLDL-C/LDL-C比值依然具有識別頸動脈斑塊尤其是多發斑塊的能力。

                  ?

                  值得注意的是,sdLDL-C/LDL-C比值診斷頸動脈多發斑塊最大靈敏度和特異度之和的cut-off值為0.30,此界值與Shen等研究的慢性腎病遠期心血管事件的sdLDL-C/LDL-C風險分層界值0.30一致,提示sdLDL-C/LDL-C在0.30時,有可能對于動脈粥樣硬化的風險分層具有十分重要的意義,也為sdLDL-C/LDL-C比值應用于臨床提供了極為有意義的參考范圍。其中,無論LDL-C水平正常與否,當sdLDL-C取值為0.90 mmol/L時,都具有較高的診斷頸動脈多發斑塊的效能,提示sdLDL-C取值為0.90mmol/L有可能為頸動脈多發斑塊的危險分層界值。

                  ?

                  對于頸動脈斑塊與sdLDL-C濃度高度相關的機制現在尚未明確,但是我們可根據幾個sdLDL-C與動脈粥硬化相關的可靠機制進行推測。例如,sdLDL-C與親和力較低的LDL受體結合,這有效地提高了sdLDL-C在血清與內皮屏障的停留時間,并且sdLDL-C顆粒較小使其容易易進入動脈壁內。此外,sdLDL-C顆粒表面極性分子減少,與動脈內膜上蛋白聚糖親和力高,易黏附于血管壁進入血管內皮細胞。sdLDL-C也極易被氧化,在內膜動脈血管壁sdLDL-C被氧化可增加單核細胞的黏附和滲透,通過刺激單核細胞化學引誘物蛋白1(MCP-1)和炎癥過程,導致泡沫細胞的形成引發動脈粥樣硬化病變的形成。

                  ?

                  本研究的不足在于樣本量較小,并且對于橫斷面研究難以確定sdLDL-C與頸動脈粥樣硬化斑塊發生之間的因果關系,另外尚需要研究其他心腦血管疾病危險因素如糖尿病發生率在sdLDL-C與頸動脈粥樣硬化斑塊中的具體作用機制。需要在今后的研究中增加人群例數并進一步完善風險因素,以進一步確定sdLDL-C在頸動脈粥樣硬化斑塊中的臨床應用價值。



                  九強生物金斯爾小而密脂蛋白膽固醇測定試劑盒(過氧化物酶法),獲得2016年中國體外診斷試劑創新產品獎。





                  試劑性能指標優異

                  在[0.14,2.59]mmol/L區間內線性相關系數r≥0.990。

                  在[0.104,0.777]mmol/L區間內測定線性偏差不超過±0.0777mmol/L。

                  在[0.777,2.59]mmol/L區間內測定線性偏差不超過±10%。

                  對于不同濃度血清樣本重復測定10次,測定值變異系數不大于10%。

                  隨機抽取3批試劑盒批間差相對極差應不大于15%。

                  樣本濃度為2.59mmol/L其吸光度變化在0.0500~0.2500之間。

                  校準品質控品的瓶間差應≤10%。

                  A600nm下測定空白吸光度≤0.05.


                  原文摘自:檢驗科空間


                   
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